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一种类泛素修饰蛋白底物鉴定方法

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专利号 2015102884783 专利名称 一种类泛素修饰蛋白底物鉴定方法
专利类型 发明专利 国际分类 C12N15/66;G01N27/64;C07K1/14;C12N15/63
申请人 苏州大学 申请地址 江苏省苏州市相城区济学路8号
发明人 朱莹;许国强 申请日期 2015-05-29
下证状态 未知 更新时间 2023-04-18 08:16:10
专利摘要 本发明涉及一种类泛素修饰蛋白底物鉴定方法,该方法首先构建带有亲和标签的类泛素修饰结合酶与类泛素修饰蛋白融合基因表达质粒,然后将所述融合基因表达质粒转染到真核细胞中,48或72小时后收集细胞并裂解,获得全蛋白裂解液,通过亲和标签分离纯化类泛素修饰蛋白底物,进一步通过胰蛋白酶酶解类泛素修饰蛋白底物,提取纯化多肽,利用质谱分析鉴定修饰底物多肽,搜索数据库获得多肽序列,比对对照样品和修饰底物的分子量变化最终确证类泛素修饰蛋白底物,本发明通过表达类泛素修饰结合酶和类泛素修饰蛋白的融合蛋白来提高类泛素修饰蛋白对底物蛋白的修饰程度,并通过亲和层析提高对底物蛋白的分离效率,可更可靠地确证类泛素修饰蛋白的底物。

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