以PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂（ICI）为代表的癌症免疫疗法是当前最具临床前景的肿瘤治疗方式之一，其通过重新激活癌症患者体的免疫细胞，从而提高对肿瘤细胞的识别和清除能力。但在临床中，仅有部分患者能从免疫治疗中获益。导致患者获益率差的主要原因之一是，临床常规组织活检，受限于取样位和检测的精准性，无法准确评估肿瘤的异质性。同时，仅依靠单一免疫标记物（如PD-L1），无法准确预测患者对ICI反馈。因此，如何精准预测免疫治疗的疗效，成为了个性化精准免疫治疗面临的首要问题。

　　针对该临床问题，北京航空航天大学常凌干团队等开发了一种新型纳米医疗芯片，可以快速检测肺癌循环肿瘤细胞（CTC）内PD-L1基因表达、以及肿瘤细胞响应免疫细胞的行为表型；进一步对患者来源的CTC进行亚群划分，依此预测肺癌患者对免疫疗法的治疗效果。与传统组织活检技术相比，临床准确率（AUC值）由57%显着提高到90%以上。

　　该研究以：Genetic and phenotypic profiling of single living circulating tumor cells from patients with microfluidics 为题，发表在了《美国国家科学院院刊》（PNAS）上。

　　图1. 循环肿瘤细胞（CTC）捕获、原位培养和基因分析芯片系统NICHE，用于肺癌免疫治疗的精准预测与监测。

　　该纳米芯片采用磁场和细胞尺寸，高效去除（>93%）血样中的白细胞，并捕获CTC使其形成单细胞阵列（>95%）。为了实现活CTCs内PD-L1基因的准确检测，研究者们设计了一种具有四面体结构的探针，实现对活细胞内PD-L1基因、内参GAPDH基因、以及CTC鉴定基因的同时检测。芯片采用实验室标签递送技术——纳米电穿孔，在2秒内将探针递送至95%细胞内，且保持良好的细胞安全性（90%），递送性能显着优于与其他常规方法（图2）。

　　图2. 在单个活细胞水平CTC内PD-L1 mRNA的精准量化。

　　完成基因检测的CTC，保持了良好的活性。通过与免疫T细胞的共培养，研究团队发现，部分肿瘤细胞在免疫抑制剂存在时，细胞形态发生了明显的变长，且细胞增殖行为被显着抑制（图3）。根据肿瘤细胞PD-L1的表达情况，研究者们划分出了PD-L1高表达与低表达的阈值；另外，根据肿瘤细胞与免疫细胞共培养的结果，研究者们划分出了肿瘤细胞形态发生变化的阈值。综合CTC中PD-L1高表达（PD-L1high）且表型发生变化（PA+）的占比，该研究定义了一种新的指标，“NICHE指数”，用于预测癌症患者响应免疫疗法的疗效。

　　图3. CTC与免疫细胞共培养下发生形态改变。

　　为了评估NICHE在临床上预测免疫疗效的性能，收集了80名非小细胞肺癌患者的外周血，通过在NICHE平台上的检测，证明了该平台捕获CTC并鉴定其基因和行为表型的能力（图4）。NICHE指数在预测临床预后方面，表现出高准确性（AUC=0.906），明显高于目前临床上基于肿瘤组织中PD-L1表达细胞占比的标准参考方法（AUC=0.578）。目前，该团队正在联合北大肿瘤医院吴楠主任，制定一项行业标准，用于肺癌免疫治疗获益人群筛选，以达到肺癌个性化医疗，有望降低临床癌症医疗负担。

　　图4. 采用NICHE系统对肺癌血样中的CTCs进行捕获与分析，并实现了患者免疫治疗的精准预测。

　　来源：生物世界